左旋咪唑是一种广泛应用于兽医学的合成驱虫药,主要用来治疗线虫引起的寄生虫感染。其作用机制是通过靶向线虫的乙酰胆碱离子通道受体,从而实现驱虫效果(Martin等)。除了医学领域,左旋咪唑在多个研究领域也得到了广泛应用,尤其是在秀丽隐杆线虫的麻痹实验中,成为研究神经元功能和肌肉生理学的重要工具。
为了深入探讨毒理学实验,以下是一个利用左旋咪唑的研究案例,研究人员可以根据此框架,使用不同的可溶性药物进行毒性研究。
材料准备:需要的材料包括带盖的6孔板、NGM培养基、M9缓冲液、100mM水溶的左旋咪唑原液、同步的成虫种群以及WMicrotrackerArena设备。
- 在NGM培养皿中培养同步的成虫种群(OP50)。
- 利用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,并转移至15毫升的无菌试管中。
- 让蠕虫静置,倒去上清液,注意不要干扰沉淀的颗粒。
- 使用5ml M9缓冲液对虫体进行清洗,可以短暂摇动或翻转试管。
- 重复上述清洗步骤,倒出上清液,再加入3ml M9缓冲液。
- 进行计数,汇总三次测定的虫数,每10μl中虫数并计算平均值。
- 制备悬浮液,目标为[35虫/10μl]。
- 将10μl虫液转移至6孔板内。
- 利用WMicroTrackerARENA观察蠕虫活动情况。
备注:该实验需进行至少3次技术重复和2次生物重复。
实验结果表明,左旋咪唑对N2运动活性存在剂量依赖的抑制反应。不同浓度的左旋咪唑(0µM(对照)、100µM和200µM)在6孔板中每孔选取35只年轻成虫N2,并在23℃下记录4小时的运动活动。数据为四个独立实验的平均值。
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