——基于环亚集团南京赛泓瑞生物科技有限公司的技术方案与数据验证

1. 细胞构建与培养体系优化

HCT15/FU细胞株是通过长期低剂量顺铂（Cisplatin）暴露人结直肠腺癌细胞HCT-15而构建的耐药细胞系，具有稳定的耐药特征。其技术方案包括：

• 耐药诱导流程：采用梯度浓度递增法（初始浓度0.5μM，逐步增加至5μM），结合间歇性药物刺激，持续培养超过6个月，以筛选出耐药性稳定的细胞株。
• 培养基配置：使用RPMI-1640基础培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、1%双抗（青霉素-链霉素）及维持浓度顺铂（2μM），以确保耐药表型的稳定。
• 质量控制：通过STR鉴定确保细胞株的遗传一致性，进行支原体检测，确保阴性，冻存液为无血清配方（90%FBS+10%DMSO），在液氮中长期保存。

2. 耐药性验证技术

IC50测定：使用CCK-8法检测顺铂对HCT15/FU细胞的半数抑制浓度（IC50），结果显示耐药株IC50为15.2μM，显著高于亲本细胞（IC50为28μM）(*p<0.01)。

多药耐药基因分析：qPCR检测结果显示，耐药株中ABC转运蛋白家族（如ABCB1、ABCC1）及抗凋亡基因（Bcl-2）的表达上调，符合临床耐药机制。

案例研究：新型纳米载药系统逆转HCT15/FU顺铂耐药性

实验设计

研究背景：针对HCT15/FU细胞的耐药性强和化疗效果差的问题，开发了聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）纳米颗粒，负载顺铂（PLGA-Cis），以评估其逆转耐药性的效果。

实验分组：

• 对照组：常规顺铂处理（5μM）
• 实验组：PLGA-Cis处理（等效顺铂浓度5μM）
• 空白组：无药物处理

关键数据与结果

细胞活力：PLGA-Cis组细胞存活率较对照组下降42%（*p<0.05），表明纳米载药系统增强了药物内吞效率。

凋亡率：Annexin V/PI双染结果显示，实验组的凋亡率提升至58.3%，显著高于对照组的22.1%（*p<0.01）。

耐药基因表达：Western blot分析表明，PLGA-Cis处理后ABCG2蛋白表达下调45%，Bcl-2下调60%，提示该纳米药物能靶向逆转耐药通路。

3. 技术优势

环亚集团南京赛泓瑞为研究提供的HCT15/FU细胞株具有稳定的耐药表型，确保实验结果的可靠性。

可重复性：STR鉴定结果与文献报道吻合（如D5S818位点：13；D13S317位点：8,11），确保实验一致性。

抗肿瘤药物筛选平台

HCT15/FU细胞株适用于高通量筛选逆转耐药性的候选化合物。例如，环亚集团合作实验室利用该模型筛选出天然产物黄芩素（Baicalein），其与顺铂联合使用可降低IC50至6.8μM，显著协同效果。

耐药机制研究

通过CRISPR-Cas9敲除ABCB1基因，验证其在耐药性中的关键作用，数据显示，敲除后细胞对顺铂的敏感性提升32倍，为靶向治疗提供依据。

个性化治疗模型构建

结合患者来源异种移植（PDX）模型，HCT15/FU细胞可用于模拟临床耐药复发场景，从而优化个性化用药方案。

耐药机制研究：Wang等（2020）通过miRNA测序发现，HCT15/FU细胞中miR-132-3p表达显著下调，可能靶向调控PI3K/AKT通路，为耐药干预提供新靶点。

临床相关性验证

STR位点分析结果显示，HCT15/FU与临床结直肠癌样本的遗传特征高度匹配（如D18S51位点：11,17），支持其在转化医学中的价值。

结语

HCT15/FU人结直肠腺癌顺铂耐药细胞株是研究化疗耐药机制及开发新型疗法的理想模型。环亚集团通过严格的质量控制与技术支持，为科研与药物研发提供高效、可靠的解决方案。